柑橘无选择标记转化体系的建立及抗溃疡病转基因甜橙种质的获得

转基因育种是常规育种的重要辅助手段，但人们担心标记基因的食品安全问题，因此，建立柑橘无选择标记的转化体系，对提高转基因作物的安全性意义重大。柑橘溃疡病是一种世界性的检疫性病害，对产业危害极大，因缺乏抗病资源和有效防控方法，该病仍无法根除。通过转基因育种，抑制病原菌致病因子的功能，获得抗病种质，是一种创新，为彻底控制溃疡病打下基础。本研究的结果如下： 1.通过将pX6-gfp中的启动子G10-90替换成CaMV35S，构建了p35S-gfp载体，并通过农杆菌介导法转化实生态甜橙，诱导了gfp的表达，证实此载体能在柑橘中成功发生重组，获得无标记的转基因植株。同时，建立了一套完善的甜橙无标记转基因体系； 2.通过农杆菌介导法对冰糖橙导入pthA-NLS基因，经PCR检测，获得了6株转基因株系。利用RT-PCR分析外源基因在转基因植株中的表达，初步表明外源基因pthA-NLS已成功转入到冰糖甜橙基因组中，并能正常表达。 3.将ScFv基因克隆到植物表达载体PBI121的Xba I和Sma I中，利用农杆菌介导法转化甜橙实生苗节间茎段，经PCR检测，获得了12株转ScFv基因甜橙，转基因甜橙温室生长。利用RT-PCR分析外源基因ScFv在转基因植株中的表达，初步表明外源基因ScFv已成功转入到大红甜橙基因组中，并能正常表达。