青枯菌定量检测方法的建立及其在花生中的应用

【目的】建立快速、准确的青枯菌定量检测方法,研究青枯菌与寄主植物的互作。 【方法】以青枯菌hrpB为靶基因,利用实时荧光定量PCR(RTQ-PCR)方法建立青枯菌的定量检测方法,并利用该方法检测花生接种青枯菌后细菌数量的变化动态。 【结果】以提取的细菌DNA为模板和以青枯菌的全细胞为模板均能对青枯菌准确定量,在未富集细菌的前提下,利用全细胞细菌定量的最低限为103 CFU/mL,检测的线性范围为103—108 CFU/mL,计数细菌的方法能准确反应青枯菌数量的差异,但该数值约是细菌平板计数法计数的1.5倍。利用RTQ-PCR计数细菌,发现接种后的3—5 d,是花生与青枯菌互作的关键时期。花生节对抑制青枯菌的扩展具有重要的作用。 【结论】RTQ-PCR计数细菌是一种简单、快速、高通量的青枯菌定量方法。