猪体细胞克隆胚胎的体外生产试验

【目的】通过优化猪体细胞核移植程序,建立获得克隆囊胚的有效方法。 【方法】比较不同电激活参数、不同体外培养条件对猪体细胞克隆胚发育能力的影响。 【结果】选用1.5kV·cm-1、80μs和1DC的参数组合,对猪核移植重构胚进行电融合和电激活,可获得较高的卵裂率和最高的囊胚发育率(分别为71.4%和14.3%),且囊胚发育率显著高于其它组(P<0.05);0.4%BSANCSU23培养液培养克隆重构胚72h,半量换液并未改善克隆胚的发育,但添加10%FBS可显著提高囊胚发育率(15.1%对10.3%,P<0.05)和DNA完整率(56.8%对46.6%,P<0.05);采用猪卵泡颗粒细胞(pGC)共培养体系未能显著提高克隆胚发育率(P>0.05),但卵丘细胞(pCC)单层共培养时,囊胚发育率显著高于对照组(16.7%对9.8%,P<0.05),培养5d的克隆胚凋亡率也显著低于对照组(39.5%对54.2%,P<0.05)。 【结论】采用1.5kV·cm-1、80μs和1DC的参数组合对猪克隆重构胚进行电融合和电激活,以0.4%BSANCSU23培养液作pCC单层共培养72h,然后换用10%FBSNCSU23培养液,可明显提高囊胚发育率。