西方蜜蜂(Apis mellifera L.)sRNA的富集与文库检测

【目的】提取及扩增蜜蜂(Apis mellifera L)sRNA,并构建文库检测富集结果是否满足高通量测序研究要求。 【方法】取蜜蜂3个级型不同发育阶段个体作为材料,分别提取总RNA后混合,从中分离出15～40nt的sRNA,反转成cDNA后构建文库,进行蓝白斑筛选。挑选288个单克隆进行测序,对测序结果进行分析。 【结果】有效序列为214条,插入的cDNA片段大小范围为15～39bp。其中,sme-miR-71c miRNA65条,ncRNA(包括tm-RNA、intron_ghI、5.8s rRNA)5条,tRNA28条,siRNA及其他sRNA33条,CDS1条,未知序列82条。 【结论】本实验采用的方法能有效富集蜜蜂sRNA,能够满足高通量测序从中识别出蜜蜂miRNA的研究。