矮牵牛细胞的长期离体培养及再生植株的ISSR分析

【目的】实现矮牵牛细胞的长期离体培养和再生,不但可以获得矮牵牛体细胞突变体,从中选出优良株系,而且可以为研究外源基因在矮牵牛细胞增殖与分化过程中的稳定性提供技术体系。 【方法】以重瓣矮牵牛叶片为外植体,使用不同浓度BA与NAA的组合在黑暗条件下诱导愈伤组织。在不同光条件下,将愈伤组织在MS+BA2.0mg·L-1+0.5mg·L-1NAA+200mg·L-1CH与MS+BA0.5mg·L-1+0.5mg·L-1NAA+200mg·L-1CH两种培养基进行愈伤组织3年多的继代培养,并利用筛选的8个引物对20个再生植株的总DNA进行ISSR分析。 【结果】不同的生长素与分裂素配比诱导的愈伤组织状态明显不同,继代后的愈伤组织在低激素培养基上分化出不定芽,再生芽复壮后可得到正常植株。对再生植株的总DNA进行ISSR分析发现,再生植株之间存在很大的遗传变异。 【结论】矮牵牛愈伤组织在高BA浓度培养基上可长期继代保存;在低激素培养基上可实现植株再生。长期离体培养矮牵牛是获得其突变体的有效方法。