水稻高效RNA干涉体系的建立及其功能分析

【目的】在水稻中建立高效RNA干涉(RNAi)技术体系。 【方法】构建适合水稻转化的RNAi诱导载体pCADS1341;为检测其有效性,使用它构建针对GUS基因的RNAi载体,并利用基因枪转化法导入GUS基因稳定表达的转基因水稻愈伤组织;为探讨影响水稻中转基因诱导的RNAi效率的因素,针对水稻基因AK121286进行系统的RNAi分析:通过Southern和Northern杂交从T0代RNAi植株中筛选出T-DNA为单拷贝插入,且基因的表达被高效抑制的株系,对来源于该株系的T1代植株进行半定量RT-PCR检测。 【结果】GUS染色分析结果表明RNAi诱导元件的瞬时表达可显著抑制GUS基因的表达;RT-PCR结果表明RNAi效应可以遗传给后代,但是不同个体中的RNAi效率存在差异。 【结论】RNAi系统的表达量可能是决定RNAi效率的最关键因素;本研究建立的高效RNAi技术体系对于水稻功能基因组学研究具有重要意义。