促冻杀虫基因工程菌的构建

利用转座酶基因位于转座单位以外的微转座子载体,将冰核基因iceA置于转座单位里,构建了携带iceA的自杀性工程质粒pTnice1, 并进一步利用该质粒的接合转移特性和Tn5转座功能,将iceA整合到阴沟肠杆菌染色体DNA上,成功地构建了在无选择压力下冰核基因仍稳定存在并有效表达冰核活性的促冻杀虫基因工程菌Enc1.2022ina。经应用试验证明,用该工程菌饲喂玉米螟幼虫,在饲菌后9 d内,虫体的过冷却点比不饲菌的对照提高10℃左右;在饲菌后第6天,于-5℃和-7℃低温下处理12 h,工程菌处理过的幼虫冻死率分别为85%和100%,而对照虫体的冻死率分别为0和5%。试验还证明,该工程菌可以在昆虫体内稳定定殖增生,在植物上附生定殖能力明显比野生型冰核细菌弱。因此,解决了阻碍冰核细菌促冻杀虫应用中的难题,为防治我国北方地区重要农林果树和仓储主要越冬害虫探索出了一条生防新途径。