Ri质粒介导TMV和CMV外壳蛋白基因转化烟草的研究

利用发根农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）Ｒｉ质粒介导的二元载体法，将ｐＢＴＣ－８质粒上的ＴＭＶ－ｃｐ和ＣＭＶ－ｃｐ基因导入烟草中。采用烟草叶片与农杆菌菌液共培养的方法，诱导出毛状根，经卡那霉素抗性筛选，进一步诱导出愈伤组织并分化再生出完整植株，转化根和植株表现卡那霉素抗性并检测到冠瘿碱的存在。ＰＣＲ扩增和ＤＮＡ斑点杂交的结果证明了ＴＭＶ和ＣＭＶ外壳蛋白基因已导入到烟草中，同时利用斑点免疫结合法的血清学实验，检测到转化株中有ＴＭＶ－ｃｐ和ＣＭＶ－ｃｐ基因的产物，从而进一步证明了ＴＭＶ－ｃｐ和ＣＭＶ－ｃｐ基因在转化的烟草中得到表达。