红千层ISSR反应体系的优化

以红千层(Callistemon rigidus R．Br．)的幼叶为材料,利用正交试验设计,对ISSR反应体系中的主要影响因子进行优化筛选,研究了Mg2+、TaqDNA聚合酶、dNTPs、引物、模板DNA浓度5种因素对扩增结果的影响,同时研究了退火温度和循环次数对PCR扩增结果的影响。实验结果表明,在25μL ISSR反应体系中各组分的最适浓度分别为:1×PCR buffer,2．5 mmol／L Mg2+,0．2 mmol／L dNTPs,0．4μmol／L引物,1．2ng／μL模板DNA,0．5UTaqDNA聚合酶。通过梯度PCR测验,适宜的退火温度为50℃,循环次数45次。并且在红千层ISSR分析中,带纹清晰,稳定性好。