不同冷冻方法对牛体外胚胎ATP含量与ROS水平的影响

【目的】探讨冷冻保存对牛体外生产胚胎能量代谢、有氧代谢造成的影响。 【方法】采用常规法或玻璃化法(open pulled straw,OPS法)冷冻保存牛体外受精(in vitro fertilization,IVF)囊胚和体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)囊胚,利用ATP Bioluminescence Assay Kit HS II和GENMED ROSAssay Kit检测了冷冻-解冻后囊胚ATP含量和ROS水平。 【结果】(1)IVF和SCNT囊胚OPS法冷冻-解冻后存活率((93.25±5.17)%和(77.56±3.52)%)均显著高于常规冷冻法((81.25±4.98)%和(49.41±2.24)%)(P<0.05);(2)IVF囊胚和SCNT囊胚OPS法冷冻-解冻后ATP含量((0.63±0.05)和(0.33±0.02)pmol)均显著高于常规冷冻法((0.45±0.03)和(0.22±0.01)pmol)(P<0.05);但是均显著低于相应的IVF或SCNT新鲜囊胚((0.76±0.04)和(0.40±0.02)pmol)(P<0.05);(3)玻璃化冷冻IVF囊胚、SCNT囊胚ROS水平((74.34±4.24)和(43.21±3.35)cps)高于新鲜IVF囊胚((48.52±2.65)cps)、SCNT囊胚((27.36±2.23)cps)(P<0.05),常规冷冻组则与此相反((35.61±4.32)和(16.56±2.52)cps)(P<0.05)。 【结论】玻璃化冷冻较适用于牛IVF、SCNT囊胚冷冻保存;玻璃化冷冻和常规冷冻均显著影响牛IVF囊胚、SCNT囊胚中ATP含量和ROS水平。