外源基因导入贡柑体胚及其人工种子构建的初步研究

用小细胞团和分散细胞混合物与两种带不同质粒的农杆菌共培养的方法，将质粒PGV3850:1103neo T-DNA上的km抗性基因和Nos/Npt基因、质粒PGV517的Km抗性基因、NPTⅡ基因和毒蛋白基因转入贡柑细胞，在含有卡那霉素的选择培养基上选择出抗性愈伤组织和幼胚。通过Nopalim和NPTⅡ酶性检测、DNA/DNA分子杂交鉴定，证明了Nos基因、NPTⅡ基因已整合到贡柑体胚的细胞基因组中并表达，苏云金杆菌的毒蛋白基因整合到贡柑细胞基因组中，第一次在柑桔类果树实现了外源基因转移。用3％海藻酸钠包埋转化体胚制备人工种子，2粒转基因人工种子已萌发。