抗柑橘衰退病RNAi载体的构建及遗传转化

柑橘衰退病(citrus tristeza virus，CTV)是世界性的柑橘病害，对我国柑橘产业的危害越来越严重。p23基因是柑橘衰退病的沉默抑制子之，在感病植株内的积累与感病程度相关。本研究拟利用p23基因，通过RNAi途径获得抗柑橘衰退病的新种质。 以柑橘衰退病强毒株的p23基因为模板，设计引物构建用于RNAi的dsRNA。通过PCR扩增第18439-18951bp 处的一段527bp片段（引入BamHⅠ-XbaⅠ酶切位点）以及第18661-18951bp处的一段305bp的片段（引入BamHⅠ-SacⅠ酶切位点），将两个片段以相反方向插入植物表达载体pBI121，命名为pCTV23-rnai。利用农杆菌介导法将该载体转入大红甜橙实生苗，通过抗生素筛选获得的抗性芽嫁接至枳橙试管苗，成活后再于温室二次嫁接至酸橙砧木。 以非转基因大红甜橙为对照，用pBI121的标记基因nptⅡ及插入片段的特异引物对温室转基因植株进行PCR鉴定，表明RNAi载体已成功转入大红甜橙，获得3株转基因苗。转基因苗的抗病性有待鉴定。