农杆菌介导枳壳转化系统的建立及PCR鉴

目的　建立农杆菌介导的枳壳转化体系。方法　以枳壳实生苗上胚轴为转化外植体，农杆菌 Ti质粒上插入了外源目的基因——柑桔衰退病病毒外壳蛋白基因 (CTV- cp)，转化植株用 GUS (β-葡萄苷酸酶 )染色及 PCR进行鉴定。结果　枳壳转化试验中，2 0 d苗龄的外植体转化再生率较高；外植体与农杆菌共培养时间以 2-3d为宜；乙酰丁香酮能较大提高转化效率，转化再生频率为 27.5 %。转化获得的抗性植株中，GUS反应呈阳性所占比例为70 .0 %。 PCR分析证实外源目的基因已整合到枳壳转化株的核基因组中。结论　成功地建立了农杆菌介导的枳壳转化系统，为利用基因工程的手段进行枳壳的抗病育种奠定了基础。