AtNPR1和Cecropin B基因共表达载体的构建

柑橘病害严重影响其外观、品质和产量,给生产带来损失。本研究利用LP4/2A作为连接肽,构建AtNPR1和抗菌肽Cecropin B基因的共表达载体,为后期转化柑橘获得抗病材料做准备。以实验室前期构建的质粒为模板扩增AtNPR1基因,并人工合成连接肽LP4/2A和抗菌肽Cecropin B基因的编码序列。利用重叠PCR将AtNPR1和LP4/2A-Cecropin B重组,并连接至表达载体pBI121,获得以35S为启动子的35S:AtNPR1-LP4/2A-Cecropin B的共表达载体。同时,本研究还进一步将35S:AtNPR1-LP4/2A-Cecropin B的表达载体中35S启动子序列替换为韧皮部特异性启动子GRP1.8的序列,成功获得GRP1.8:AtNPR1-LP4/2A-Cecropin B的特异性共表达载体。目前,35S:AtNPR1-LP4/2A-Cecropin B和GRP1.8:AtNPR1-LP4/2A-Cecropin B共表达载体均构建完成并已成功转入农杆菌GV3101。抗病基因AtNPR1和Cecropin B共表达载体的构建将为以后转化和筛选转基因抗病柑橘准备材料。