抗异丙隆多克隆抗体的研制

【目的】为了建立测定脲类除草剂异丙隆残留的免疫分析方法(ELISA),对制备高效价抗异丙隆多克隆抗体的方法进行了研究。 【方法】以对异丙基苯基异氰酸酯、N-甲基吡咯环酮和N-甲基己内酰胺为反应原料,经两步化学反应合成了两种异丙隆半抗原:1-(3-丙基羧基)-3-(4-异丙基苯基)-1-甲基脲(HAPTEN 4C)和1-(5-戊基羧基)-3-(4-异丙基苯基)-1-甲基脲(HAPTEN 6C)。通过活性酯法将半抗原与载体蛋白(BSA、OVA)偶联制备了两种异丙隆的人工抗原HAPTEN 6C-BSA和HAPTEN 4C-OVA。利用免疫抗原HAPTEN 6C-BSA免疫新西兰大白兔获得了高效价的异丙隆的多克隆抗体。建立了以HAPTEN 4C-OVA为包被原的间接竞争ELISA方法。 【结果】合成的半抗原经薄层色谱、IR、1HNMR确证;人工抗原HAPTEN 6C-BSA和HAPTEN 4C-OVA的结合比分别为46﹕1和36﹕1。抗血清的最高效价为1.6×105。经优化确定的间接竞争ELISA分析方法中包被抗原的浓度为0.1μg.ml-1,抗血清的工作稀释倍数为1.0×105。根据异丙隆的标准抑制曲线,异丙隆对免疫反应的的IC50值为0.07μg.ml-1。抗体对氯溴隆、绿谷隆、特丁塞隆等6种取代脲类除草剂的交叉反应率都小于0.1%。 【结论】异丙隆是小分子,本身没有免疫活性,也没有与载体蛋白偶联的活性基团。高效价、高特异性抗体的制备是利用免疫学方法进行异丙隆残留分析的最关键因素。本研究合成的两种异丙隆的相似物具有不同长度碳链的羧基,并且使异丙基和苯基充分暴露,具备了异丙隆半抗原的特点。将半抗原偶联到载体蛋白上获得的人工抗原经免疫兔子后获得了高效价、高特异性的抗异丙隆抗体。