山羊SOX2多克隆抗体制备

【目的】构建山羊Sox2原核表达载体—pRSET-Sox2,并将诱导表达、纯化的His-Sox2融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备Sox2多克隆抗体。 【方法】从pMD18T-Sox2载体上以Bam H I和Xho I双酶切截取Sox2片段,然后将其亚克隆到pRSET-A表达载体上,获得pRSET-Sox2重组质粒。转化了pRSET-Sox2的大肠杆菌BL21(DE3),1 mmol.L-1 IPTG 37℃诱导4 h,SDS-PAGE电泳及Western blotting检测融合蛋白表达。相同条件下大量增菌诱导,用Ni-NTA argrose介质分离纯化His-Sox2重组蛋白。将体外复性的融合蛋白皮下注射新西兰大白兔,间隔2—3周注射一次,共4次。最后一次注射后7 d,采血分离血清,用Western blotting检测抗体特异性。 【结果】(1)原核表达载体pRSET-Sox2在大肠杆菌BL21(DE3)得到了高效表达;(2)纯化的His-Sox2融合蛋白能够满足多克隆抗体制备的要求;(3)经Western blotting检测,Sox2多克隆抗体能与His-Sox2融合蛋白特异性结合。 【结论】制备了高特异性山羊Sox2多克隆抗体,为深入探讨山羊Sox2基因的生物学功能奠定了基础,也为山羊(iPS)细胞检测创造了良好条件。