大麦黄矮病毒缺失复制酶基因植物表达载体的构建及转基因小麦的获得

以大麦黄矮病毒ＧＰＶ 株系的ＲＮＡ 为模板， 采用反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，扩增出１１３４ｂｐ 的缺失复制酶基因。将扩增的片段克隆到ｐＵＣ１９ 的Ｓｍ ａＩ位点上并进行了序列测定，获得正向插入的重组质粒ｐＵＣ１９Ｄ。以ＫｐｎＩ和ＸｂａＩ从ｐＵＣ１９Ｄ 上切下此基因并插入质粒ｐＥｍ ｕ－ｍ ｃｓ－Ｎ 得到植物表达载体ｐＰＰＩ８。应用花粉管通道法转化普通小麦品种陇鉴１２７、陕１６０ 和晋麦４７，通过卡那霉素抗性筛选、ＰＣＲ和ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 检测，３ 个品种均获得了转基因小麦植株。