Kisspeptin-10对无血清培养鸡F₁级卵泡颗粒细胞孕酮分泌的影响及机制研究

【目的】研究kisspeptin-10对无血清培养的鸡卵泡颗粒细胞孕酮分泌的作用及可能机制。 【方法】选取200日龄处于产蛋高峰期的伊莎蛋鸡,于排卵前剖腹收集F1卵泡,分离纯化颗粒细胞,于含胎牛血清培养基中培养24 h,换成无血清培养基稳定培养24 h后,用不同浓度的Kp-10、U73122、EGTA等单独或共同处理细胞,收集细胞上清,放射免疫学方法检测培养基中孕酮含量。 【结果】(1)通过免疫细胞化学方法,显示颗粒细胞上有Kp-10免疫活性样物质的阳性表达;(2)Kp-10处理可显著增加无血清培养的颗粒细胞的活力,100 nmol.L-1时可显著促进孕酮的分泌(P<0.05);(3)与对照组相比,2μmol.L-1U73122(磷脂酶C抑制剂)对孕酮的分泌无显著影响(P>0.05),而0.5、2μmol.L-1U73122能显著降低Kp-10对孕酮分泌的促进作用(P<0.05);(4)钙离子阻断剂Verapamil(1—100μmol.L-1)呈剂量依赖性降低孕酮的分泌,于100μmol.L-1时达显著降低水平(P<0.05);与1μmol.L-1Verapamil单独处理组相比,100 nmol.L-1Kp-10与1μmol.L-1Verapamil同时处理可显著增加孕酮的分泌,而与10、100μmol.L-1Verapamil共同处理不能逆转其对孕酮分泌的抑制作用(P>0.05),且胞内钙离子含量与上清液中孕酮分泌水平相一致;(5)与100 nmol.L-1Kp-10处理组相比,1和5 mmol.L-1EGTA共同处理时孕酮分泌显著降低,当再加入1.5 mmol.L-1Ca2+时孕酮分泌量显著增加。 【结论】Kp-10促进体外培养的鸡卵泡颗粒细胞孕酮的分泌,其机制可能与胞内Ca2+信号通路有关。