多重PCR检测捻转血矛线虫苯并咪唑类药物抗性等位基因

利用GoenBank发表的捻转血矛线虫B微管蛋白葵因组DNA序列设计2对引物,建立检测捻转血矛线虫苯并咪哇类药物抗性的多重PcR方法,利用该方法检测我国不同地区捻转血矛线虫对苯并咪哇类药物的抗性,并用生物学检测验证,结果表明,建立的多重PCR方法在杭性检测上具有很强的特异性,澳大利亚抗性虫株只有F1和F3条带,上海敏感虫株只有F2和F3片段;序列分析证实抗性虫株编码B微管蛋白第200位氮墓酸的密码子为TAC,敏感虫株为TTC。并且该法具有很高的灵敏性,检测基因组DNA的最低量为50ng。生物学检测,澳大利亚杭性虫株丙硫苯咪哇LD₅0ml,上海敏感虫株的LD50为0.0023,与多重PCR结果相符,说明多重PCR可以用于捻转血矛线虫苯并咪吐类药物抗性的检测.利用该技术检测源于新疆石河子、伊宁,安徽五河,江苏南京、徐州等地的虫株发现,这些地理株均表现为敏感型,丙硫苯咪哇LD50在0.0023-0.0032之间,提示我国捻转血矛线虫苯并咪哇类药物抗性尚不严重。